▶▷ 加宝供卵代怀 > 代生孩子 >

供卵怀孕有母乳吗_昆明纳瑞丨细胞计数与存活的测试实验方法

有做供卵试管的姐妹吗

细胞冷冻与复苏是细胞培养的常规工作,可以解决细胞因为连续继代造成的退变或转化。细胞的原代培养和传代培养以及细胞冻存和复苏后都需要细胞计数。那么细胞计数与存活的测试实验方法有哪些呢?

1、原理:

(1)计算

细胞

数目可用血球计数盘或是Coultercounter粒子计数器自动计数。

(2)血球计数盘一般有二个chambers,每个chamber中细刻9个1mm2大正方形,其中4个角落之正方形再细刻16个小格,深度均为0.1mm。当chamber上方盖上盖玻片后,每个大正方形之体积为1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用时,计数每个大正方形内之细胞数目,乘以稀释倍数,再乘以104,即为每ml中之细胞数目。

(3)存活测试之步骤为dyeexclusion,利用染料会渗入死细胞中而呈色,而活细胞因细胞膜完整,染料无法渗入而不会呈色。一般使用蓝色之trypan blue染料,如果细胞不易吸收trypan blue,则用红色之Erythrosin bluish。计算细胞活率:活细胞数/(活细胞数+死细胞数)×100%。计数应在台盼兰染色后数分钟内完成,随时间延长,部分活细胞也开始摄取染料;因为台盼兰对蛋白质有很强的亲和力,用不含血清的稀释液,可以使染色计数更为准确。

2、材料:

0.4%w/v trypan blue(GibcoBRL15250-061);Erythosin bluish stain;取0.1gram Erythrosin bluish(SigmaE-9259)及0.05gram preservative methyl paraben(SigmaH-3647)溶于100mlCa++/Mg++freesaline;血球计数盘及盖玻片(Hemocytometerandcoverslip);计数器(counter);低倍倒立显微镜;粒子计数器(Coultercounter,CoulterElectronics)。白细胞稀释液(4%乙酸溶液)。

卵巢功能差供卵有希望吗

3、步骤:

(1)取50μl细胞悬浮液与50μl trypan blue(orErythrosinbluish)等体积混合均匀于1.5ml小离心管中。

(2)取少许混合液(约15μl)自血球计数盘chamber上方凹槽加入,盖上盖玻片,于100倍倒立显微镜下观察,活细胞不染色,死细胞则为蓝色(或红色-Erythrosin bluish)。

(3)计数四个大方格之细胞总数,再除4,乘以稀释倍数(至少乘以2,因与trypanblue等体积混合),最后乘以104,即为每ml中细胞悬浮液之细胞数。若细胞位于线上,只计上线与右线之细胞(或计下线与左线之细胞)。

注:4大格细胞总数×稀释倍数×104/4=细胞数/ml;每一大格的体积=0.1cm×0.1cm×0.01cm=10-4ml计数板计数时,最适浓度为5~10×105细胞/ml,此范围外计数误差偏大。高浓度细胞悬液,可取出部分作稀释或连续稀释后计数。

5、范例:

T75 monolayer culture制成10ml细胞悬浮液,取0.1ml溶液与0.1ml trypan blue混合均匀于试管中,取少许混合液加入血球计数盘,计数四大方格内之细胞数目。

活细胞数/方格:55,62,49,59;死细胞数/方格:5,3,4,6;细胞总数=243

没有月经供卵能做试管婴儿

平均细胞数/方格=60.75;稀释倍数=2;

细胞数/ml:60.75×104×2(稀释倍数)=1.22×106;

细胞数/flask(10ml):1.22×106×10ml=12.2×106

存活率:225/243﹦92.6%

全自动细胞计数器


用于细胞实验中质控和评判细胞状态。适用于计数浓度为

1*10

5

-3*10

7

/ml,

直径

5-180um

大小的所有哺乳动物细胞、昆虫细胞,淋巴细胞、肿瘤细胞及部分浮游生物等不同种类的实验样本。比如用于

293

总细胞浓度和活率测量。

特点:

1

)专利定焦计数,无需调焦,减少人为调焦造成实验误差

(2)

一次可以检测

5

个样品,操作简单快捷

(3)

测量结果稳定准确,误差<

5%

简介:

供卵和自卵有区别吗

在细胞实验中,您还在人工计数吗?人工计数对细胞样品要求高,重复性差,误差大,结果不可溯源。

Countstar

实验室新款细胞计数仪,专利定焦设计,操作简便,仅需

20s

就可完成一个样品测量;同时一次性可以检测

5

个样,大大提高您的实验效率,节省您的宝贵时间;测量

CV

值<

5%,

这样一款测得又快又准的细胞计数仪,您细胞间值得拥有。欢迎了解试用哦!


昆明纳瑞科技有限公司

你好,这个没有具体的数值,目前是移植五周的话,做B超应该要看到胎心胎芽,一般血β-hcg在几万

怎么选择供卵妹子好

供卵怀孕有母乳吗_昆明纳瑞丨细胞计数与存活的测试实验方法

参考资料
14年品牌沉淀 aa68国际助孕中心·因孕而生
助孕中心资讯热点
供卵试管婴儿医院新闻热点